分離純化是將多糖混合物分離為單一多糖的過程。在進(jìn)行菌種鑒定時(shí),所用的微生物一般均要求為純的培養(yǎng)物。得到純培養(yǎng)的過程稱為分離純化。
一、目的條帶分離純化的目的:
使在PCR過程中擴(kuò)增出的目的片段在得率上提高、特異性增強(qiáng)、濃度上提高等,說白了就是是最終產(chǎn)物的純度增加,以便提高后續(xù)實(shí)驗(yàn)的成功率。
二、需用到此步驟的實(shí)驗(yàn)
1、質(zhì)粒構(gòu)建:TA克隆和質(zhì)粒構(gòu)建時(shí),需要將目的片段和質(zhì)粒重組,此時(shí)目的片段需要純化。
純化方式:一般瓊脂糖凝膠電泳分離,膠回收試劑盒回收。
2、文庫(kù)構(gòu)建:在高通量測(cè)序中,此時(shí)的目的片段是以長(zhǎng)度來判別的,其中small RNA建庫(kù)需要page膠切割回收。
純化方式:長(zhǎng)鏈建庫(kù):磁珠純化;small RNA:PAGE膠純化
3、sanger測(cè)序:在DNA甲基化或qPCR產(chǎn)物等實(shí)驗(yàn)中,需要引物特異性擴(kuò)增然后切膠回收。
分離純化的方法不拘泥于物理變化還是化學(xué)變化。在可能的條件下使樣品中的雜質(zhì)或使樣品中各種成分分離開來的變化都可以使用。
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